Human Papillomavirus (HPV) высокого канцерогенного риска – скрининговое определение генотипов (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68) и генотипирование 16 и 18 типов [реал-тайм ПЦР, Roche Cobas 4800]

Исследование, направленное на обнаружение генетического материала (ДНК) вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска с генотипированием 16 и 18 типов вируса. Выявляется 14 генотипов ВПЧ на основе метода полимеразной цепной в режиме реального времени с мультиплексной детекцией (Roche Cobas 4800).

Синонимы русские

Вирус папилломы человека высокого канцерогенного риска; ВПЧ высокого канцерогенного риска; ДНК [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени, Roche Cobas 4800].

Синонимы английские

Human Papillomavirus; HPV; high carcinogenic risk; DNA [polymerase chain reaction, real-time PCR, Roche Cobas 4800].

Какой биоматериал можно использовать для анализа?

Мазок смешанный из цервикального канала и поверхности шейки матки.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Женщинам рекомендуется сдавать мазок до менструации или через 2 дня после её окончания.

Общая информация об исследовании

Вирус папилломы человека (ВПЧ или HPV) представляет собой семейство ДНК-содержащих вирусов, являющихся причиной различных поражений кожи и слизистых оболочек человека. Известно более 100 типов ВПЧ, которые могут быть ассоциированы с появлением бородавок, папиллом, остроконечных и плоских кондилом, предраковых изменений (дисплазий) и рака шейки матки, влагалища, вульвы, рака прямой кишки, полового члена и новообразований некоторых других локализаций (например, орофарингеальной карциномы). Источником инфекции является больной человек или вирусоноситель. Основным путем передачи инфекции является половой путь. Возможно также заражение через бытовые предметы общего пользования и вертикальный путь передачи, от инфицированной женщины к ребенку во время беременности или родов.

Различают генотипы ВПЧ, инфицирование которыми приводит к развитию доброкачественных процессов, и тех, которые обладают высоким риском злокачественного перерождения. Генотипы ВПЧ 1, 2, 3, 4, 5, 10, 28, 49 относятся к неонкогенным; генотипы 6, 11, 13, 32, 34, 40, 41, 42, 43, 44 имеют низкий онкогенный риск; генотипы 26, 30, 53, 65 обладают средним онкогенным риском; генотипы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, относятся к ВПЧ высокого канцерогенного риска и 66, 68 относятся к типам вероятного риска для человека. В составе генома онкогенных типов ВПЧ имеются участки, ответственные за синтез определенных белков. Онкопротеины Е6 и Е7 подавляют процессы апоптоза (запрограммированной клеточной гибели) в клетках с измененным генетическим материалом. Они играют большую роль в развитии злокачественного опухолевого процесса. Участки генома L1 и L2 ответственны за синтез структурных белков капсидной оболочки вируса.

Инфицирование высокоонкогенными типами ВПЧ может быть ассоциировано с развитием цервикальной интраэпителиальной неоплазии (ЦИН/CIN) и рака шейки матки у женщин. Рак шейки матки занимает третье место в структуре заболеваемости женщин России злокачественными новообразованиями. В большинстве случаев, в 90%, онкологический процесс представлен плоскоклеточной карциномой, реже – другими гистологическими вариантами (аденокарцинома и аденоплоскоклеточная карцинома). Длительная персистенция вируса и высокий уровень его содержания может быть ассоциирован с тяжестью заболевания.

К основному методу скрининга рака шейки матки и предраковых состояний относится цитологическое исследование по Папаниколау (мазок по Папаниколау). Согласно общепринятым рекомендациям, его проводят всем женщинам в возрасте от 21 года вне зависимости от возраста начала половой жизни с интервалом 3 года до достижения 65 лет. Для женщин в возрасте 30-65 лет может быть использована альтернативная скрининговая программа с интервалом 5 лет, предполагающая одновременное проведение двух анализов: цитологическое исследование по Папаниколау и ДНК-тестирование ВПЧ методом полимеразной цепной реакции. Следует отметить, что в молодом возрасте ВПЧ может спонтанно элиминироваться из организма и не детектироваться с помощью современных методов. При этом в 70 % случаев в течение первого года и в 90 % случаев через два года после инфицирования возможно самоизлечение.

Использование комбинированной диагностики (цитологического исследования и ДНК-тестирования) повышает эффективность обнаружения предраковых состояний, ЦИН 2 и 3 степени выраженности, рака шейки матки.

К современным методам диагностики относится метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (реал-тайм ПЦР). Полимеразная цепная реакция – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять генетический материал исследуемого возбудителя. Он характеризуется высокими показателями диагностической чувствительности и специфичности, быстротой получения конечного результата и доступностью. Особенностью метода является возможность выявлять ДНК (дезоксирибонуклеиновую кислоту) вируса даже при малом содержании её в исследуемом биологическом материале. Метод основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК.

Использование реал-тайм ПЦР позволяет в режиме реального времени наблюдать рост количества ПЦР-продукта в отдельном исследуемом биоматериале, следовательно, определять точное исходное количество образца в пробе. Возможно одновременно выявлять несколько исследуемых параметров в мультиплексном формате. Анализатор и тест-система Roche Cobas 4800 сочетает в себе автоматизированную подготовку проб для исследования и обнаружение 14 генотипов ВПЧ на основе метода ПЦР в режиме реального времени с мультиплексной детекцией. Это позволяет генотипировать и количественно определять наличие ВПЧ 16 и ВПЧ 18 типов, а также пул из 12 типов ВПЧ высокого канцерогенного риска (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68). В качестве внутреннего контроля реакции используется β-глобин человека. Использование метода реал-тайм ПЦР Roche Cobas 4800 для скринингового определения генотипов ВПЧ высокого канцерогенного риска является рекомендованным, апробированным и клинически проверенным. Применение данного диагностического метода позволяет одновременно генотипировать вирус на ВПЧ 16 и ВПЧ 18, определять точную концентрацию ДНК данных типов вируса (вирусную нагрузку). Данные типы вируса относятся к наиболее канцерогенным и ассоциированным с клинически значимым риском развития ЦИН 3 степени или рака шейки матки. Генотип ВПЧ 16 чаще встречается при плоскоклеточной карциноме, а ВПЧ 18 при аденокарциноме. Таким образом, возможно выявление генотипов ВПЧ высокого канцерогенного риска, концентрации ВПЧ 16 и 18 типов, прогнозирование риска развития инфекции, ЦИН и рака шейки матки, а также определение тактики, контроля проводимой терапии и оценки возможности развития рецидива после лечения.

Для чего используется исследование?

• Для оценки риска развития процессов и заболеваний, ассоциированных с ВПЧ: цервикальной интраэпителиальной неоплазии (ЦИН 2 и 3 степени выраженности) и рака шейки матки, влагалища, вульвы, рака прямой кишки, орофарингеальной карциномы;
• Для скрининговой диагностики генотипов ВПЧ высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68);
• Для дифференциальной диагностики и генотипирования ВПЧ 16 и 18, с определением концентрации ДНК данных типов вируса;
• Для мониторинга инфекции, вызванной ВПЧ, и прогнозирования ее течения;
• Для контроля за эффективностью лечения предраковых заболеваний, ассоциированных с ВПЧ;
• Для определения тактики, контроля проводимой терапии и оценки возможности развития рецидива после лечения

Когда назначается исследование?

• При клинических проявлениях и подозрении на развитие онкологического процесса аногенитальной области;
• При наличии кондилом, бородавок половых путей и других морфологических изменений эпителия различных локализаций;
• При скрининге рака шейки матки у женщин старше 30 лет в рамках комбинированной диагностики (цитологического исследования и ДНК-тестирования методом полимеразной цепной реакции);
• При выявлении ВПЧ неуточненного генотипа;
• При выявлении цитологических изменений в мазке на атипию, при цитологическом исследовании мазка по Папаниколау, в гистологическом препарате;
• При наблюдении за инфицированными ВПЧ;
• При лечении рака и предраковых состояний, ассоциированных с ВПЧ;
• При определении тактики, контроля проводимой терапии и оценки возможности развития рецидива после лечения.

Что означают результаты?

Референсные значения

Причины положительного результата:

• Инфицирование ВПЧ высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 генотипов);
• Повышение концентрации ДНК ВПЧ 16 и/или 18 генотипов.

Причины отрицательного результата:

• Отсутствие инфицирования и генетического материала ВПЧ высокого канцерогенного риска в исследуемом биоматериале;
• Содержание ДНК вируса ниже уровня детекции.

Что может влиять на результат?

• Длительное хранение биоматериала до его поступления в лабораторию, замораживание биоматериала или его термическая обработка, загрязнение биоматериала посторонними молекулами ДНК.
• Предшествующая противовирусная терапия.

Важные замечания

• Инфицирование ВПЧ не всегда приводит к развитию ЦИН высокой степени выраженности, раку шейки матки или онкологических процессов другой локализации. Возможна самостоятельная элиминация вируса и спонтанное самоизлечение в течение 1-2 лет после инфицирования.
• Диагностика инфекции, ассоциированной с ВПЧ высокого канцерогенного риска, является комплексной и основана на сочетании анамнестических, клинических данных и результатах лабораторного обследования, цитологического и гистологического исследований.

Также рекомендуется

• Human Papillomavirus 16/18 (HPV 16/18), ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Human Papillomavirus 31/33 (HPV 31/33), ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Human Papillomavirus высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы), ДНК генотипирование [реал-тайм ПЦР]
• Human Papillomavirus высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы), ДНК количественно, без определения типа [реал-тайм ПЦР]
• Human Papillomavirus низкого (HPV 6, 11, 44) и высокого (HPV 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82) канцерогенного риска, ДНК (выявление, генотипирование и количественное определение) [реал-тайм ПЦР]
• Human Papillomavirus 16 (HPV 16), ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Human Papillomavirus 18 (HPV 18), ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Human Papillomavirus 16/18 (HPV 16/18), ДНК (выявление, генотипирование и количественное определение) [реал-тайм ПЦР]

Кто назначает исследование?

Акушер-гинеколог, уролог, дерматовенеролог, инфекционист, онколог, проктолог, педиатр, оториноларинголог.